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  CRISPR-Cas9技術原理
  CRISPR(clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats)是一種來自細菌降解 入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機制。在細菌及古細菌中,CRISPR系統共分成3類,其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關蛋白(Cas蛋白)共同發揮作用,而Ⅱ類系統只需要一種Cas蛋白即可,這為其能夠廣泛應用提供了便利條件。
  目前,來自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系統應用最為廣泛。Cas9蛋白(含有兩個核酸酶結構域),可以分別切割DNA兩條單鏈。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結合成復合物,然后通過PAM序列結合并侵入DNA,形成RNA-DNA復合結構,進而對目的DNA雙鏈進行切割,使DNA雙鏈斷裂。
  由于PAM序列結構簡單(5'-NGG-3’),幾乎可以在所有的基因中找到大量靶點,因此得到廣泛的應用。CRISPR-Cas9系統已經成功應用于植物、細菌、酵母、魚類及哺乳動物細胞,是目前最高效的基因組編輯系統。
 
 
 
 
  CRISPR-Cas9技術優勢
  1.效率高:可精確編輯基因組,敲除效率高
  2.周期短:CRISPR-Cas9系統的構建和使用極為方便,極大降低了實驗難度,縮短實驗周期
  3.高嵌合率,生殖遺傳穩定;
  4.多重編輯能力:可實現多個靶位點同時進行基因打靶;
  5.可實現大片段DNA敲除、敲入、條件性敲除。
 
 
 
 
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